Каталог Рефератов - Тонкослойная хроматография и ее роль в контроле качества пищевых продуктов

	Информационно-образоательный портал
	Рефераты, курсовые, дипломы, научные работы,



МЕНЮ\|

поиск

Тонкослойная хроматография и ее роль в контроле качества пищевых продуктов

асло, молочный жир. 2 г продукта высыпают в стаканчик, подогревают до 40° С и растворяют в 30 мл н-гексана.

Сметана, 30--40%-ные сливки. 5 г продукта отвешивают в стаканчик, добавляют 10 мл насыщенного раствора поваренной соли и переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл. Стаканчик обмывают 40 мл ацетона, смывы переносят в делительную воронку, которую встряхивают 1--2 мин, добавляют 70 мл хлороформа и встряхивают 2--3 мин. Воронку оставляют на 3--5 мин (до разделения фаз), нижнюю фазу слипают в колбу для отгонки растворителей, растворители отгоняют, а остаток смывают 30 мл л-гексана.

Творог, сыр. 10 г творога или измельченного на терке сыра растирают с 10 мл насыщенного раствора поваренной соли и переносят в делительную воронку на 250--300 мл. Прибавляют 80 мл ацетона, встряхивают 2 мин, прибавляют 100 мл хлороформа и вновь встряхивают. Нижнюю фазу используют для анализа после отгонки растворителей, растворив остаток в 30 мл н-гексана.

Очистка экстракта от молочного жира. В нижнюю часть хроматографической колонки помещают стекловату, затем насыпают в колонку 70 мл силикагеля АСК и уплотняют его постукиванием. Колонку промывают 50 мл гексана, а прошедший через нее растворитель отбрасывают. На подготовленную таким образом колонку наносят 30 мл полученного из молока или молочных продуктов экстракта. После впитывания экстракта в сорбент пестицид элюируют 110мл смеси бензола с гексаном (3:8) порциями по 25--30 мл. Элюат собирают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250--300 мл. Через 10 мин после впитывания последней порции растворителя сорбент отжимают с помощью резиновой груши. После очистки растворители отгоняют под вакуумом.

Хроматографирование. На хроматографическую пластинку на расстоянии 1,5 см от ее края шприцем или пипеткой наносят исследуемую пробу в одну точку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см.

Остаток экстракта в колбочке смывают тремя небольшими порциями (по 0,2 мл) диэтилового эфира, которые наносят в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см наносят стандартные растворы, содержащие 1,5 и 10 мкг исследуемых препаратов. Для нанесения 1 мкг стандартный раствор следует разбавлять в 10 раз.

Пластинку с нанесенными растворами помещают в камеру для хроматографирования, на дно которой за 30 мин до начала хроматографирования наливают подвижный растворитель н-гексан, а для препаратов, у которых Rf в гексане ниже 0,3 -- смесь гексана с ацетоном (6:1). Край пластинки с нанесенными растворами может быть погружен в подвижный растворитель не более чем на 0,5 см.

После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку орошают проявляющим реактивом и подвергают УФ-облучению 10--15 мин (лампа ПРК-4). Пластинки следует располагать на расстоянии 20 см от источника света.

При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке появляются пятна серо-черного цвета. Количественное определение осуществляют сравнением размеров пятен пробы и стандартного раствора (визуально или измеряют площади). Между количеством препарата в пробе, не превышающем 20 мкг, и площадью его пятна на пластинке существует прямая пропорциональность. При большем содержании препарата следует использовать пропорциональную часть исследуемого экстракта.

Расчет количества препарата в пробе вычисляют по формуле:

X = A / P или

где X -- содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л; А -- количество препарата, найденное путем визуального сравнения со стандартным раствором, мкг; Р -- масса или объем исследуемой пробы, г или мл; А1 - содержание препарата в стандартном растворе, мкг; S1 - площадь пятна стандартного раствора, мм2; S - площадь пятна пробы, мм2.

Величина Rf зависит от адсорбента, размера его частиц, количества и природы связующего материала, толщины слоя, природы подвижного растворителя, степени насыщения камеры для хроматографирования парами подвижного растворителя, расстояния пройденного растворителем, температуры, количества и природы коэкстрактивных веществ.

Для ДДТ Rf для оксида алюминия составляет 0,61-0,71 (в зависимости от изомера) и 0,50-0,54 на силикагеле.

На слое оксида алюминия обнаруживаются три пятна, которые соответствуют 4,4'-ДДТ (основное пятно), 2,4'-ДДТ и 4,4'-ДДД (слабое пятно). Пятно ДДД проявляется, если содержание ДДТ в анализируемой пробе превышает 20 мкг. Содержание изомеров ДДТ суммируют. На хроматограммах проб пищевых продуктов, содержащих остаточные количества ДДТ, кроме упомянутых трех пятен, обнаруживается четвертое пятно, соответствующее продукту разложения ДДТ -- ДДЭ.

На слое силикагеля технический препарат ДДТ дает одно пятно, соответствующее сумме изомеров. Если количество ДДТ в пробе превышает 20 мкг, на хроматограмме появляется слабое пятно, соответствующее ДДД. [5]

2.2 Определение о,о-диэтил-8-(6-хлорбензоксазолинил-3-метил)-дитиофосфата (фозалона) в яблоках методом тонкослойной хроматографии

Фозалон применяется для борьбы с вредителями сада. [6]

В литературе описана идентификация фозалона и определение его в растениях колориметрическим и биологическим методами [7].

Однако эти методы весьма громоздки, так как требуют сложной очистки растительных экстрактов. Нами был разработан простой качественный и количественный метод определения остаточных количеств фозалона в яблоках с применением тонкослойной хроматографии. Исходным веществом служил чистый препарат фозалона. Опыты проводили с яблоками сорта Ренет Симиренко.

После испытания ряда экстрагентов для извлечения фозалона из яблок был избран хлороформ. Для идентификации фозалона применили метод тонкослойной хроматографии.

При подборе подвижной фазы был изучен ряд органических растворителей и их смесей. Наилучшей для идентификации фозалона является смесь гексана с ацетоном в соотношении 4:1.

Для проявления фозалона на хроматографических пластинках был испытан ряд реактивов, рекомендованных для проявления фосфорорганических пестицидов [8 - 11].

Наилучшие результаты дали 0,2%-ный раствор хлористого палладия [L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47b (1966).] или смесь 0,05 %-ного раствора бром-фенолового синего в ацетоне с 1%-ным водным раствором AgNО3 в соотношении 1:1, с последующим отбеливанием хроматограмм 2,5%-ным раствором лимонной кислоты [Л. М. Фукельман. Сборник трудов ВИЗР, вып. 20, ч. 4, 61 (1964).]. Эти проявители позволяют обнаруживать до 1 мкг фозалона.

Рис. 5. Тонкослойная хроматограмма фозалона1 из экстракта яблок на силикагеле КСК. а - место нанесения экстракта; б - точка нанесения стандарта; в - место отложения фозалона

Рис. 6. Двухмерная тонкослойная хроматограмма фозалона из экстракта яблок на силикагеле КСК. а -- б -- место нанесения экстракта с содержанием фозалона 50 мкг; в, г, д - точки нанесения стандартных растворов фозалона, соответственно 25, 50 и 75 мкг.

Предлагаемая методика определения фозалона в яблоках заключается в следующем. 100 г яблок измельчают, наносят пипеткой определенное количество фозалона. Экстрагируют хлороформом при встряхивании на шутель-аппарате 1,5 часа. Хлороформный экстракт отделяют от растительной массы фильтрованием. Растительную массу на фильтре промывают трижды хлороформом (по 20 мл). Фильтрат и промывные порции хлороформа собирают в колбу для отгонки растворителя. Хлороформ отгоняют под вакуумом до объема 5--10 мл. Переносят его количественно в стаканчик, упаривают до 0,5 мл и наносят на пластинку полоской шириной 1 см длиной 5 см на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки.

Для хроматографирования используют стеклянные пластинки размером 9 X 15 см, на которые наносят тонкий слой силикагеля марки КСК (40 меш), закрепленный гипсом.

Хроматографирование проводят в системе гексан -- ацетон (4:1).

Пластинки проявляют указанными выше проявителями. Причем в случае применения хлористого палладия пятна фозалона окрашиваются в желтый цвет на белом фоне, а примеси --.в коричневый. Окраска не исчезает в течение длительного промежутка времени. При применении второго проявителя пятна фозалона окрашиваются в синий цвет на желтом фоне, а примеси совсем не окрашиваются. Следует отметить, что в этом случае пятна фозалона через 10--15 мин. бледнеют. Rf фозалона равно 0,5 (рис. 5).

Чувствительность метода 0,1 мг/кг.

Этот вариант метода позволяет качественно определять содержание фозалона в растительной пробе.

Для количественного определения фозалона в пробе мы использовали двухмерную хроматографию на пластинках размером 15 20 см.

Экстракцию и отгонку проводят так же, как и в предыдущем случае. Экстракт без очистки наносят на пластинку полоской длиной 5 см и шириной 1 см на расстоянии 1,5 см от нижнего края (нижняя сторона пластинки 15 см) и 2 см от левого края пластинки.

Хроматографирование проводят в подвижном растворителе гексан -- ацетон (4 : 1). Дают растворителю продвинуться на 12--15 см, потом пластинку высушивают на воздухе в течение 20 мин. Далее поворачивают ее на 90е так, чтобы левый край пластинки служил основанием. С левой стороны пластинки наносят стандарты с разным содержанием фозалона и хроматографируют в том же подвижном растворителе. С целью получения хорошо сформированных пятен проводят повторное хроматографирование в том же направлении, но с применением другого подвижного растворителя -- хлороформа.

После проявления пластинок теми же реактивами, что и в предыдущем случае, получали пятна с Rf = 0,82 (рис. 6). Количественное определение фозалона проводят сравнением пятна анализируемой пробы с пятнами стандартов.

Предложенным методом было проведено определение остатков фозалона в яблоках (см. таблицу).

Определение фозалона в 100 г яблок

Внесено фозалона, мкг	Найдено фозалона, мкг	Ошибка	Внесено фозалона, мкг	Найдено фозалона, мкг	Ошибка
		мкг	%			мкг	%
25	20	5	- 20	75	70	5	- 6,7
50	45	5	-10	100	85	15	- 15
50	40	10	- 20

Глава 3. ТСХ - оборудование
3.1 Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ для инструментальной ТСХ

Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ позволяет провести все рабочие этапы современной тонкослойной хроматографии:

§ дозировка и нанесение проб

§ проведение процесса хроматографии

§ УФ-обнаружение

§ детектирование (окрашивание) хроматограмм

§ видеозапись изображений пластинок

§ количественная обработка хроматограмм

Объекты исследования и области применения планарной хроматографии

1. Готовые лекарственные формы

§ подлинность действующих веществ

§ точность дозировки

§ наличие вредных примесей и добавок

2. Фармакология

§ фармакокинетические исследования

§ изучение метаболизма действующих веществ

3. Биохимия и медицина

§ определение содержания важнейших биологически активных соединений в жидкостях и тканях организма

§ изменение содержания этих веществ при патологии

§ судмедэкспертиза

§ допинг-контроль

4. Охрана окружающей среды

§ анализ пестицидов в питьевой и сточных водах, осадках, продуктах питания

§ анализ токсических веществ (например, афлатоксинов) в продуктах питания

3.1.1 Портативный набор для тсх
Портативный набор для ТСХКомплект предназначен для качественного и полуколичественного анализов многокомпонентных смесей органических и неорганических веществ и может найти применение во всех областях науки и техники, где для анализа используется метод тонкослойной хроматографии.Комплект позволяет:

§ проводить анализ смесей методом ТСХ, основанном на разделении анализируемых веществ за счет различной скорости перемещения их по тонкому слою сорбента, нанесенного на плоскую подложку (стеклянную, полимерную или алюминиевую);

§ наносить точное количество анализируемых веществ на хроматографические пластины;

§ анализировать одновременно большое количество проб;

§ обнаруживать и просматривать хроматограммы в ультрафиолетовом свете;

§ окрашивать хроматограммы;

§ удалять органические растворители с хроматограмм высушивающим устройством с подогревом.

Комплект включает:

§ Ультрафиолетовый осветитель УФО-254

§ Хроматографическую камеру для пластин размером 130-130-56 см

§ Пластины для ТСХ (10х10), одна упаковка - 50 шт

§ Пульверизатор для вязких и агрессивных жидкостей

§ Пульверизатор для маловязких и неагрессивных жидкостей

§ Фен

Торрированные стеклянные капилляры V=1 ml

3.1.2 Базовый набор для ТСХ

Базовый набор для ТСХ (расширенный)

§ УФ-кабинет 254/365 (ультрафиолетовая лампа) - 1 шт.

§ Спрей-камера коррозионностойкая (камера для окрашивания хроматограмм методом опрыскивания) - 1 шт.

§ Столик с подогревом для нанесения образцов на пластины - 1 шт.

§ Камера хроматографическая (для пластин 15x15 см) - 2 шт.

§ Камера хроматографическая (для пластин 10x10 см) - 2 шт.

§ Сушильный шкаф ШСУ - 1 шт.

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6

© 2003-2013
Рефераты бесплатно, курсовые, рефераты биология, большая бибилиотека рефератов, дипломы, научные работы, рефераты право, рефераты, рефераты скачать, рефераты литература, курсовые работы, реферат, доклады, рефераты медицина, рефераты на тему, сочинения, реферат бесплатно, рефераты авиация, рефераты психология, рефераты математика, рефераты кулинария, рефераты логистика, рефераты анатомия, рефераты маркетинг, рефераты релиния, рефераты социология, рефераты менеджемент.